羊水細胞培養在產前診斷中的應用價值論文
資料與方法
一般資料 選擇2017年4月~2017年4月在本院產科就診的具有產前診斷指徵的178例孕婦, 年齡20~47歲, 孕周16~25周, 有70例孕婦唐氏綜合徵篩查為陽性, 23例孕婦有異常生育史, 60例孕婦年齡≥35歲, 14例婦女於早孕服藥, 6例孕婦神經管急性篩查為陽性, 5例孕婦丈夫染色體異常。
方法
羊膜穿刺 經b超定位後, 在無菌條件下, 用一次性羊水穿刺針行羊膜穿刺術。捨棄最開始的2 ml羊水, 再抽取20~30 ml的羊水放入2支無菌離心試管中。
羊水細胞培養 以1000 r/min的離心速度將2支無菌試管中的羊水進行離心處理達10 min, 捨棄上層清液, 保留管內沉澱細胞和0.5 ml羊水, 加入20%胎牛血清及含張氏成分的5 ml f10培養基, 用細管使之混勻, 將其接種於t-25的無菌試管中, 在37℃有5%二氧化碳培養環境中進行培育, 5 d後觀察細胞生長情況, 若發現纖維狀或者梭狀細胞生長是, 則可更換5 ml新鮮培養液進行傳代培養[2]。
收穫細胞並進行製片 在對羊水細胞進行培養6~7 d後, 在倒置的顯微鏡下對正在培養的羊水細胞進行觀察, 觀察其生長情況, 發現有不同大小的梭長形細胞正在進行克隆並生長, 每個克隆過的細胞其生長狀態良好並且已經形成細胞島。對培養皿中的培養液進行定時的更換, 每天對細胞進行觀察, 在觀察2~3 d後, 發現每個形成的細胞島已經逐漸長成為透亮細胞, 這些細胞較大, 細胞融合度達到70%~80%, 並且數目不等, 形狀多呈圓形或類圓形, 這時即可對細胞進行收穫。在對細胞進行收穫的前1 d, 更換新鮮培養液, 在培養液中加入秋水仙素, 使其濃度達到0.1 mg/ml, 在4~5 h後, 使用顯微鏡觀察, 發現培養液中出現大量的呈魚眼狀的細胞時, 即可對細胞終止培養並進行收穫。加入0.25%的2 ml胰酶消化液, 在37℃的環境下放置5 min, 使得瓶壁上細胞脫落, 再以1500r的轉速離心處理8 min, 棄上清液。加入1.5 ml的0.4%枸緣酸鈉和0.4%的氯化鉀混合液低滲7 min, 滴片, 常規g顯帶。每張玻片有20~30個細胞分裂相, 進行染色體核型分析, 每例分析核型5個。
核型統計分析 使用顯微鏡對細胞核型進行觀察, 常規技術分散良好的細胞核型有30箇中期分裂相, 細胞核型計數發生異常的則有50個分裂相, 如出現≥2個細胞核型計數異常, 則對所有分裂相進行計數, 使用染色體核型分析軟體對核型影象進行採集, 對3~5個核型進行分析, 並完成報告, 為遺傳諮詢提供意見。
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