母猪繁殖障碍疾病的血清学调查报告

母猪繁殖障碍疾病的血清学调查报告

摘要:随着猪场规模化、集约化程度的不断提高,猪病的种类也在不断增加,特别是近年来的母猪繁殖障碍性疾病严重制约生猪产业的发展。2004年我们引进了带有外种血缘的外种猪洋二元母猪，进行了优良品种推广，结果80%的猪场母猪普遍出现第一胎发生流产、早产、死胎，新生仔猪和断奶仔猪发病率和死亡率增高，高达20%，而母猪一般无临庆症状，对这情况我们凝似是母猪繁殖障碍性疾病，故进行了血清调查。共采血抽样237份，分离血清212份，并对分得的212份血清全部进行蓝耳病（PRRS）检测，其中阳性80份，阳性率37.7%；对其中的160份血清进行了伪狂犬（PR）检测，160份进行了猪瘟（HC）检测，160份血清进行了细小病毒（PPV）检测。结果表明:一十三个猪场均有以上母猪繁殖障碍病存在。由此可见：母猪繁殖障碍病在我县外种猪场已普遍存在。

关键词：母猪;繁殖与呼吸综合征;调查;血清学;检测

As hog farms have increased in both size and efficiency,so have hog disease types,In rencent yesrs,the problem has been especially serious among breeding sows,where disease has increased inferticity and negatively affected the development of the hog breeding industry In 2004,blood was collected from 237 sous From these,212 samples of serum were successfully produced and tested for bluc Ear pisease (PRRS) positive test rate Was 37.7 percent (80 positive samples)Also tests for three types of disease porcine pseuudo rabies(PR),swine Fever(HC),and wicroscopic Viral infection (PPV)were performed,each test on 160 of the samples.

Sow;porcine reproductive and respiratory

母猪繁殖障碍疾病是近年来危害母猪的一种主要的疫病，现已被广范受到人们的重视，它以妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎、产弱仔、畸形胎和母猪不育、配不上种为主要特征的一类疾病。此病主要包括猪瘟(HC)、猪伪狂犬病(PR)、猪细小病毒病(PPV)、繁殖障碍与呼吸综合征(PRRS)和猪乙型脑炎(JE)等几种病。2004年我们对存在有明显繁殖障碍病的13个猪场的237母猪头进行采血，分离血清212份，并对分得的212份血清全部进行了检测，对其中的160份血清进行了猪伪狂犬、猪细小病毒检测，并根据检测结果对母猪繁殖障碍原因进行了分析总结，现将详细情况分述如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 被检血清

被检血清来13个母猪场，耳静脉采血，3600转/min分离血清，待检。

1.1.2 主要诊断试剂

蓝耳病ELISA试剂盒：由美国IDEXX公司提供；

猪瘟诊断抗原及阴、阳性血清：由兰州兽医研究所提供；

猪伪狂犬LAT诊断液试剂盒：由华中农业大学提供；

猪细小病毒LAT诊断液试剂盒：由华中农业大学提供。

1.2 方法

1.2.1母猪繁殖于呼吸综合症方法：间接ELISA

A采样：常规采血，分离血清，无腐败、溶血、凝块和沉淀。

B准备：

A试验前将所有试剂从冰箱中取出，置室温下达到室温，并轻轻摇匀，用后立即放回冰箱。

B将达到室温并完全溶解的洗液深缩用灭菌水或去离子水稀释10倍。

C将待检血清用稀释液进行40倍稀释；注意匆将阳性/阴性对照血清稀释。

C取出抗原孢被的96孔板（该板的1、3、5、7、9、11列孔包被的PRRS抗原，2、4、6、8、10、12列孔包被的正常MARC—145细胞抗原），在工作表上标记好样品的位置。

D取100UL阴性血清分别加入C1、C2、D1、D2孔中。

E取100UL阳性血清分别加入A1、A2、B1、B2孔中。

F取100UL稀释的待检血清分别加入相邻的PRRS抗原孔和MARC—145细胞抗原孔（NHC）中。

H在室温下孵育30mim。

L将反应板孔里的液体倒入废液缸，并在吸水纸上扣干。

J每孔加入300UL洗涤液（含Tween—20的PBS），置室温约3mim，弃去孔中液体，重复3—5次，最后一次在吸水纸水轻轻扣干。

K每孔加入100UL酶标抗体复合物，在室温下孵育30mim。并利用此空隙，取等量底物浓缩液和底物稀释液混匀（如5.5ml：5.5ml）。

L重复I、J操作。

M每孔加入100UL稀释好底物溶液，在室温下孵育15mim。

N每孔加入100 终止液

O用酶联免疫检测仪于650NM波长下测定各孔的吸光度值。

Q结果判定：

a pc：PRRS—NC：PRRS≥0.150，试验方成立。

b S/P≥0.4，样品血清PRRS抗体阳性；S/P＜0.4，样品血清PRRS抗体阴性。

1.2.2 猪瘟检测方法：正向血凝试验

a取一洁净玻片，以蜡笔划成3—4c㎡小格，如下图

血清号 第1格 第2格 第3格 第4格

阳性血清对照 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml

阴性血清对照 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml

血清样品1 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml

血清样品2 0.08ml 0.04ml 0.02ml 0.01ml

b试验前，先将待检血清、标准血清和抗原置于室温，使其达到20℃。

B将待检血清、标准血清按上表中的量，垂直接触玻片分别加到各方格内。

C摇匀抗原，每一血清格内分别垂直加入0.03ml抗原。

D自0.01ml血清格开始，用牙签将抗原与血清完全混合，摊开直径2CM左右，依次至0.02ml、0.04ml、0.08m血清格，一个血清样使用一牙签。

E轻轻摇动玻片后，室温静置5—8min。春冬季节室温较低时，可置于30℃左右的温箱中。

F记录结果

出现大凝集片或小粒状物，液体完全透明，即100%凝集。

有明显凝集片和粒，液体几乎完全透明，即75%凝集。

有可见凝集片和颗粒，液体不甚透明，即50%凝集。

1.2.3 猪伪狂犬检测方法：乳胶凝集试验

操作步骤

取待检样品、阳性/阴性对照血清和稀释液各一滴，分别置于玻片上，各加一滴乳胶抗原，用牙签或火柴棍搅拌，并轻轻摇动1—2min后，于3—5min内观察结果。

也可将血清作倍比连续稀释，每个稀释度加乳胶抗原进行定量分析。

C判定结果：

A所有对照成立，即阳性血清呈“ ”，阴性血清和稀释液呈“—”，试验方有效。样品出现“++”以上者为阳性。

1.2.4 猪细小病毒检测方法：乳胶凝集试验。

2 调查内容

2.1 流行病学调查：通过查阅记录，调查种源、胎次，发病的季节性。

2.2 饲养管理调查：主要包括饲料质量，营养成份，有无霉变；有无环境、机械等不良因素引起的，防疫、免疫、消毒是否落实到位。

2.3 临床病例剖解：包括对繁殖母猪的临床检查及对发病母猪所产部分弱仔及新生病仔猪的病理剖检观察。

2.4 血清学检测：对采得的212份血清样品进行蓝耳病抗体检测和部分血清的伪狂犬、猪瘟、猪细小病毒检测。

2 检测结果及讨论

3.1发生繁殖障碍的母猪有长白、约克及长白╳约克，发病母猪没有明显的品系差别；发病的胎次主要集中在第一胎，在第一胎过后，很多母猪不再表现明显的繁殖障碍病(说明在第一胎过后产生了抗体对该病有一定的免疫保护力)；发病没有季节性，一年四季均可发病；发病猪主要表现产死胎、木乃伊胎、弱仔和新生仔猪发病死亡。

3.2 猪场的饲料基本上都统一饲喂母猪专用料，不存在霉变和质量问题，也无环境或机械因素引起的流产和死胎。在采血检查时除两家猪场拿不出严格的免疫记录档案外，其他猪场都按免疫程序进行了免疫，并做到定期消毒。

3.3 剖检弱仔和新生病仔猪，大体表现一致，体表贫血苍白，皮下脂肪多黄染，肾呈土黄色，在表面有小出血点，有的淋巴结水肿出血呈大理石样状，心包积液，小叶性肺炎，肝褐黄色。

3.4 血清学检测结果：

母猪繁殖障碍疾病血清学检测统计表

猪场 蓝耳病 伪狂犬 细小病毒 繁殖障

碍病史

样品数 阳性数 阳性率 样品数 阳性数 阳性率 样品数 阳性数 阳性率

1场 35 10 28.6% 14 8 57.1% 14 6 42.9% 11头流产、死胎、木乃伊胎

2场 32 7 21.9% 17 10 58.8% 17 8 47.1% 记载不详

3场 14 5 35.7% 14 10 71.4% 14 9 64.3% 14头流产、死胎、木乃伊

4场 20 14 70.0% 20 14 70.0% 20 16 80.0% 4头发流产

5场 26 13 50.0% 13 11 84.6% 13 9 69.2% 记载不详

6场 13 2 15.4% 13 6 46.2% 13 7 53.8% 9头流产、死胎、弱仔、木乃伊、

7场 9 1 11.1% 9 6 66.7% 9 5 55.6% 1配不上种、1头产死胎、7头流产、弱仔

8场 11 0 0.0% 11 8 72.7% 11 8 72.7% 11头流产、死胎、木乃伊、弱仔

9场 12 7 58.3% 12 6 50.0% 12 7 58.3% 12头流产、死胎、弱仔、木乃伊

10场 7 2 28.6% 7 6 85.7% 7 4 57.1% 7死胎、木乃伊

11场 7 3 42.9% 4 2 50.0% 4 3 75.0% 7头发生过流产、死胎、木乃伊

12场 24 16 66.7% 24 20 83.3% 24 17 70.8% 24头发生过流产、死胎、弱仔

13场 2 0 0.0% 2 2 100.0% 2 1 50.0% 2头后备发病猪

合

计 212 80 37.7% 160 109 68.1% 160 100 62.5% 110头繁

殖障碍

4 小结与分析

4.1 通过流行病学、饲料、饲养管理和对弱仔、新生病仔猪剖检等各个方面的调查，排除了母猪繁殖障碍病因为品种、种源、饲料和饲养管理因素造成的可能。因为剖检有一定的病理变化，说明是由病毒或病原微生物等致病因素引起。

4.2 本次监测采样全由专业人员把关操作，蓝耳病检测采用美国进口ELISA试剂，微电脑数控机洗板，伪狂犬、细小病毒采用华中农业大学LAT试剂盒，其灵敏度高，监测结果可靠。

4.3 监测猪均未接种蓝耳病疫苗免疫，经过猪伪狂犬、猪细小病毒疫苗免疫，被监测种猪群体中有蓝耳病阳性(+)，说明有感染猪或曾经感染过；伪狂犬、细小病毒的免疫合格率分别达到68.1%和72.5%说明了种猪的免疫效果较好。

4.4 本次监测的样本较大，检测结果具有代表性，监测结果，蓝耳病样品阳性37.7%(80/212)，其中1至5场样品阳性率38.58%（49/127），猪场蓝耳病样品阳性率比较高；伪狂犬和细小病毒的免疫阳性率比较高，说明种猪在经过免疫或曾经感染后产生了对该病的较高抵抗力，免受强毒的攻击。

4.5 在本次的调查中还发现，同一头猪在蓝耳病呈阴性（-），伪狂犬、细小病毒免疫抗体都达到免疫保护力的情况下，仍然存在繁殖障碍病，说明该猪场发生的繁殖病不仅由蓝耳病、伪狂犬、细小病毒引起，还有其它繁殖障碍疾病参与。　

5 防制建议

繁殖障碍性疾病，特别是蓝耳病，它是我县的首次监测到的一个新病，它对养猪业的危害较重，一是引起严重的种猪繁殖障碍，导致其它疫病的免疫抑制，产生免疫失败；二是隐性猪瘟很难控制和消除，是母猪繁殖障碍的潜在杀手；三是猪伪狂犬和猪细小病毒通过免疫后不能准确的判断是否是决定性致病因素。面对当前繁殖障碍病，首先是加强蓝耳病的免疫，控制毒力在群内的进一步传播；其次是进一步加强猪瘟、猪伪狂犬、猪细小病毒的免疫，使猪群免疫合格率提高，降低因此三种病导致流产、死胎等的可能；第三是严把引种关，避免到蓝耳病疫区调种猪，引种时必须经蓝耳病检测阴性（－）方能引进；第四是进一步对几种繁殖病进行准确的监测诊断，并加大监测面，淘汰净化阳性病猪，保持猪场干净。

参考文献

1.《猪的重要传染病防治研究新成果》；

2.《基础兽医学》；

3.《动物实验室操作技术基础知识》；